談人參皂苷Rg3自微乳化微球的制備及影響因素的論文
海藻酸鈉( ALG) 又被稱為藻朊鈉、褐藻膠或褐藻酸鈉，是由天然褐藻或細(xì)菌中提取出來的一種天然多糖和陽離子結(jié)合形成的鈉鹽。海藻酸鈉以其良好的生物降解性和生物相容性，被廣泛應(yīng)用于各個(gè)領(lǐng)域。大量研究顯示使用海藻酸鈉制備的緩釋微球pH 敏感性的特性，而且制得的微球形態(tài)圓整、粒徑大小適宜。研究表明，人參皂苷Rg3具有較好的抑制腫瘤細(xì)胞增殖、抑制腫瘤細(xì)胞浸潤、抗腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的作用等。但人參皂苷Rg3在水中的幾乎不溶，其口服血藥濃度很低，故提高藥物的溶解度是近來研究的熱點(diǎn)。但傳統(tǒng)的液體自乳化給藥系統(tǒng)是封裝在軟膠囊或硬膠囊中，生產(chǎn)過程復(fù)雜、生產(chǎn)成本高昂、服用不方便; 制劑成分與膠囊殼可能存在相容性問題，長期儲(chǔ)存后可能發(fā)生膠囊泄露。本實(shí)驗(yàn)采取自乳化釋藥系統(tǒng)，并用靜電滴法將其制成微球，以期既提高藥物的溶解度，提高生物利用度，又便于服用，同時(shí)，考察微球形成的影響因素。
1 試藥與儀器
1. 1 藥品、試劑
Isopropanol( 色譜純，天津市四友精細(xì)化學(xué)品有限公司) ，Ethyl oleate( 上海千為油脂科技有限公司) ，CremophorRh40( 上海運(yùn)宏化工制劑輔料技術(shù)有限公司，德國BASF 生產(chǎn)) ，Triton X100( 上海凌峰化學(xué)試劑有限公司) ，人參皂苷Rg3原料藥對照品，由吉林亞泰制藥股份有限公司提供，批號20111205，氯化鋇( 廣東省精細(xì)化學(xué)品工程技術(shù)研究開發(fā)中心) 海藻酸鈉( 上海精細(xì)化工科技有限公司) ，水為超純水。
1. 2 儀器
Microinfusion Pump WZ - 50C2 ( 浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)儀器有限公司) ，電子天平AL204( 梅特勒- 托利多儀器( 上海) 有限公司) ，TGL80 - 2B 高速離心機(jī)( 上海安亭科學(xué)儀器廠) ，85 - 2 型恒溫磁力攪拌器( 鞏義市予華儀器有限公司) ，GF-Ⅱ高壓靜電發(fā)生器( 蘇州市自晟涂裝工程有限公司) ，冷凍干燥機(jī)FD - 1( 北京德天佑科技發(fā)展有限公司) ，Waters高效液相色譜儀( 600Pump; 600 Controller; Water 2487 Dualλ Absorbance Detector) ( 美國沃特世公司) ，Ql - 901 渦旋混合器( 海門市其林貝爾儀器制造有限公司) ，AS - 20500A超聲波清洗器( 天津奧特賽恩斯儀器有限公司)
2 實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果
2. 1 人參皂苷Rg3 自微乳的制備
以平衡溶解度、偽三元相法篩選出最佳的自乳化處方為Cremophor Rh40: Triton X100( 1 ∶ 1) /Isopropanol /Ethyl oleate/H2O = 0. 32 ∶ 0. 32 ∶ 0. 26 ∶ 0. 10 ∶ 2. 00，按相應(yīng)質(zhì)量比稱取上述處方各成分于燒杯中，用恒溫磁力攪拌器于37 ℃攪拌至澄清透明狀，即為空白微乳。取上述配制的空白微乳，向其中加入過量的人參皂苷Rg3 原料藥，磁力攪拌10min，取出，以8500rpm 的轉(zhuǎn)速離心20 min，吸取上清液，即為人參皂苷Rg3 微乳。制得載藥自微乳體系，用于后續(xù)微球制備的模型藥物。
2. 2 微球的制備
精密稱取海藻酸鈉，加到“1. 2. 1”項(xiàng)下的人參皂苷Rg3微乳中，( 海藻酸鈉與純水的比例為1. 5 ～ 2. 0 ∶ 100) ，磁力攪拌器中攪拌約1. 5 h，使海藻酸鈉完全溶解并混合均勻。再精密稱取BaCl2溶在50 mL 的.純水中得30 mmol /L 的BaCl2溶液。將海藻酸鈉與微乳的混合液體置于特定的20mL 注射器內(nèi)，使微泵上注射器針頭的底端與BaCl2溶液的液面相距約2 cm，節(jié)微泵的速度為30 mL/h，BaCl2溶液中放入磁石，在磁力攪拌器中不斷攪拌。將高壓靜電發(fā)生器的負(fù)極連接注射器的針頭，正極放入BaCl2溶液中，微泵開始注射。當(dāng)液滴開始從注射針頭滴下后緩慢調(diào)節(jié)高壓靜電的電壓，注射完之后取2 mL BaCl2溶液待檢測，并收集BaCl2溶液中的微球，用純水洗滌即得濕態(tài)微球。將濕態(tài)微球置于- 80 ℃的條件下預(yù)凍4 h 以上，再于冷凍干燥機(jī)內(nèi)凍干24 h，則得到干燥微球，稱重。
2. 3 人參皂苷Rg3 含量測定方法的建立
2. 3. 1 色譜條件色譜柱: Kromasiol ODS - C18柱( 4. 6mm × 240 mm，5 μm) ; 流動(dòng)相: 磷酸( 調(diào)pH = 2) : 乙腈=48 ∶ 52; 進(jìn)樣量: 20 μL; 流速: 1. 0 mL/min; 檢測波長: 203nm; 柱溫: 40 ℃。
2. 3. 2 對照品溶液的配制精密量取約人參皂苷Rg3 粉10. 50 mg 于100 mL 容量瓶中，加甲醇渦旋震蕩片刻，再超聲10 min 使其完全溶解，并稀釋至刻度，搖勻得濃度為105μg /mL 的對照品溶液，備用。
2. 3. 3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備及線性關(guān)系考察精密吸取
2. 3. 2 項(xiàng)下的對照品溶液5. 00 mL，稀釋2 倍，配成濃度為52. 5 μg /mL 對照品溶液，再進(jìn)一步稀釋，分別配成濃度為0. 5、5. 25 μg /mL 的對照品溶液。進(jìn)樣20 μL，以進(jìn)樣濃度( X) 為橫坐標(biāo)，峰面積( Y) 為縱坐標(biāo)，并以最小二乘法進(jìn)行線性回歸，計(jì)算回歸方程y = 6 898. 6x + 4 689. 9，R2 = 0. 9998。結(jié)果表明: 人參皂苷Rg3 進(jìn)樣濃度在5. 25 ～ 105 μg /mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。
2. 3. 4 供試品溶液的配制準(zhǔn)確稱取“2. 2”項(xiàng)下制備的人參皂苷Rg3 微乳微球4. 94 mg，于5 mL EP 管中，用2. 00mL 的甲醇超聲溶解10 min，在14800 r /min 轉(zhuǎn)速下離心3min，取上清液即得供試液。同法制備不含人參皂苷Rg3 的空白陰性對照液。
2. 3. 5 專屬性實(shí)驗(yàn)分別吸取人參皂苷Rg3 的對照品和供試品溶液以及空白自乳微球溶液20 μL 注入高效液相色譜儀中。結(jié)果顯示，空白自微乳化微球溶液對檢測無干擾，說明該方法對人參皂苷Rg3 的檢測專屬性良好。
2. 3. 6 精密度和回收率實(shí)驗(yàn)精密吸取空白自微乳化微球溶液100 μL 共3 份，分別于5 mL EP 管中，再向其中加入人參皂苷Rg3 對照品儲(chǔ)備液( 0. 5、1、1. 5 mL) ，渦旋混勻。按“2. 3. 1”下色譜條件進(jìn)行測定人參皂苷Rg3 的含量，計(jì)算日內(nèi)精密度、日間精密度( n = 3) 和回收率( n = 5) 。結(jié)果，人參皂苷Rg3 高、中、低3 種濃度日內(nèi)、日間精密度分別為1. 4%、1. 9%、1. 67% 和1. 73%、1. 53%、2. 01%，人參皂苷Rg3 低、中、高3 個(gè)濃度的回收率分別為98. 27%、98. 41%、99. 05%，RSD 為1. 31%、1. 28%、0. 69%。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該法準(zhǔn)確可靠。
2. 4 微球的質(zhì)量評價(jià)
2. 4. 1 微球的物理特性光學(xué)顯微鏡下觀察新制的微球，結(jié)果顯示微球外觀圓整，表面光滑，分散均勻且不粘連，見插頁Ⅻ圖1。隨機(jī)取冷凍干燥后的微球，進(jìn)行噴金處理，然后于電鏡下放大200 倍和500 倍觀察微球表面形態(tài)，見插頁Ⅻ圖2，可見到孔狀結(jié)構(gòu); 放大30 倍考察其粒徑分布，見插頁Ⅻ圖3。結(jié)果顯示濕態(tài)時(shí)微球的平均粒徑在1. 5 ～ 2. 00 mm 左右，而凍干狀態(tài)下微球的平均粒徑為0. 8 ～ 1. 0 mm。
2. 4. 2 自乳化微球的重分散性隨機(jī)取60 個(gè)微球，隨機(jī)分成3 份，分別置于一定量的pH2 的鹽酸溶液中、等量純水中和等量的pH6. 8 的磷酸緩沖液中，在恒溫磁力攪拌器上低速攪拌，并控制溫度在37 ℃。結(jié)果顯示在鹽酸溶液中和純水中的微球不溶脹，在pH6. 8 的緩沖溶液中的微球在10 ～ 40 min 內(nèi)微球開始溶脹，70 min 時(shí)所有微球都完全溶脹破裂，均勻分散，成澄清透明，有淡藍(lán)色乳光的溶液，說明自乳化微球基本保持人參皂苷Rg3 自乳化特性。
2. 4. 3 包封率的考察準(zhǔn)確稱量凍干的人參皂苷Rg3 自乳化微球12. 62 mg 于干燥試管中，用10 mL 甲醇稀釋并超聲溶解，再在14800 r /min 條件下離心3 min，取上清液20μL 用HPLC 測定含量。根據(jù)《中華人民共和國藥典》中對微球的相關(guān)規(guī)定按如下公式計(jì)算包封率: 包封率% = ( 系統(tǒng)中的總藥量- 液體介質(zhì)中未包封的藥量) /系統(tǒng)中的總藥量× 100%微球的包封率為85. 3%。
2. 5 微球形成的影響因素
2. 5. 1 攪拌速度對微球的影響相同濃度的BaCl2溶液，分別以低速、中速、和高速的攪拌速度攪拌，觀察微球的形成情況，見表1，結(jié)果顯示攪拌速度對微球形成幾乎沒有影響。
3 討論
龐煥等對參一膠囊進(jìn)行人體藥代動(dòng)力學(xué)研究，發(fā)現(xiàn)口服3. 2 mg /kg 后血藥濃度很低，最大血藥濃度Cmax值僅為( 16 ± 6) ng /mL。為了促進(jìn)人體Rg3 的體內(nèi)吸收，以微乳為載體研制成自微乳制劑來提高其溶解度和生物利用度，而固體的自乳化系統(tǒng)既能克服液體劑型儲(chǔ)存等不便因素，又保持自乳化給藥系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn)，故本研究采用靜電滴制法制備人參皂苷Rg3 自乳化海藻酸鈉微球。在海藻酸微球的制備中發(fā)現(xiàn): ( 1) 海藻酸與氯化鋇的濃度是關(guān)鍵; ( 2)隨著海藻酸鈉的濃度增大，微球的包封率會(huì)上升但是拖尾嚴(yán)重且固化時(shí)間會(huì)延長; ( 3) 滴制時(shí)控制高壓靜電的電壓，一定范圍內(nèi)，隨著電壓差增大微球的粒徑會(huì)減小，選擇使液滴盡可能小但又不會(huì)飄，本實(shí)驗(yàn)最終調(diào)節(jié)電壓約為500V最為理想; ( 4) 對微球形成的影響因素的實(shí)驗(yàn)表明縮短固化時(shí)間可降低藥物的流失從而提高藥物在微球中的含量。通過單因素分析，優(yōu)化載藥微球的制備的條件: 海藻酸的濃度為1. 5%，氯化鋇溶液的濃度為30 mmol /L。按上處方、條件制備的微球平均粒徑為1. 0 mm 左右、表面性能及球形度好、無聚集現(xiàn)象，但部分還稍有拖尾，微球的包封率較高，達(dá)到《中華人民共和國藥典》的標(biāo)準(zhǔn)。而制備的微球在PH6. 8 磷酸鹽溶液中70 min 即溶脹，在水、鹽酸中不溶脹，表明該微球既有自微乳的特性又有腸溶的特性。
采用靜電滴制、以海藻酸與氯化鋇為基本處方制備的載藥微球，條件溫和，不需要有機(jī)溶媒，設(shè)備和工藝簡單易行，模型藥物選擇廣泛，尤其對難溶性藥物、對藥物粒徑要求不高( 口服制劑) 的有優(yōu)勢。
【談人參皂苷Rg3自微乳化微球的制備及影響因素的論文】相關(guān)文章：
影響面試成績的因素02-22
淺談民族院校社會(huì)體育專業(yè)學(xué)生就業(yè)的影響因素及對策論文01-03
影響?zhàn)B老金水平的因素10-24
新西蘭留學(xué)獎(jiǎng)學(xué)金申請的影響因素09-10
農(nóng)村縣城微商自媒體的創(chuàng)業(yè)者狀況調(diào)查09-11
柳袁照寫作講評課教學(xué)的文化的因素影響的論文06-14