鉛暴露對(duì)豬免疫功能影響論文
【摘要】 目的 探討飼料中添加不同劑量鉛對(duì)豬免疫功能的影響。方法 將24頭14～17 kg仔豬隨機(jī)分為4組，用正常飼料和分別添加5，15，45 mg/kg(分別為低、中、高劑量組，均按含鉛量計(jì))醋酸鉛的飼料對(duì)其進(jìn)行90 d攻毒飼養(yǎng)試驗(yàn)。測(cè)定豬血液中白細(xì)胞數(shù)量(wbc)、血清中免疫球蛋白(igm、 igg 、iga)、和補(bǔ)體(c3，c4)含量，并使用四甲基偶氮噻唑鹽(mtt)法檢測(cè)血液中t淋巴細(xì)胞活力。結(jié)果 低劑量組t淋巴細(xì)胞活力降低29.3％，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0．05)；中劑量組iga含量下降0.12 g／l，t淋巴細(xì)胞活力降低25.2％，與對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0．05)；高劑量組的白細(xì)胞(wbc)．igm、igg、iga、c3含量分別下降4.3×109，1.48，0.13，0.14，0.31 g/l，t淋巴細(xì)胞活力下降37.4％，與對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。結(jié)論 飼料中含鉛量達(dá)到5 mg／kg時(shí)影響豬免疫功能，高于45 mg／kg時(shí)可導(dǎo)致豬免疫力顯著降低
【關(guān)鍵詞】 鉛；飼料；豬；免疫功能
abstract： objective to study the effect of lead exposure on immune function of pigs.methods twenty-four pigs were randomly divided into four groups and were fed for 90 days with normal feeds and feeds with lead content of 5 mg/kg(low dose)，15 mg／kg(medium dose)，45 mg/kg(high dose),respectively.the number of white blood cell(wbc)and igm，igg iga，c3，c4 level in serum were measured and t lymphocyte activity was determined by mtt method.results t瞝ymphocyte activity in low瞕ose group decreased by 29.3％ compared with the control group(p<0.05).the content of iga and t瞝ymphocyte activity in the medium瞕ose group decreased by 0.12 g/l and 25.2％,respectively,compared with the control group(p<0.05).the content of wbc，igm，igg iga and c3 in high dose group decreased by 4.3×109/l，1.48 g/l，0.13 g/l，0.14 g/l，0.31 g/l,respectively.while the t瞝ylnphocvte activity was 37.4％lower than that of the control group，and all the differenes compared with the control group were statistical significant(p<0.05).conclusion the immunity of pigs could be affected by lead in feed when its content was up to 5 mg／kg,and could be signincantly dereased with the lead content above 45 mg/kg.
key words：lead；feed；pig；immune function
近年來(lái)，伴隨飼料工業(yè)的發(fā)展，為滿足畜禽快速生長(zhǎng)需要，我國(guó)畜牧業(yè)生產(chǎn)過(guò)程中存在盲目向飼料中添加過(guò)多微量元素的現(xiàn)象，導(dǎo)致飼料中鉛超標(biāo)的情況時(shí)有發(fā)生，對(duì)畜禽健康和食品安全造成潛在的危害〔1〕。Www.133229.cOm有研究表明，長(zhǎng)期低劑量鉛暴 露可以抑制t淋巴細(xì)胞的增殖和分化〔2,3〕，并導(dǎo)致血清中免疫球蛋白igm，igg含量降低〔4〕。本研究觀察飼料中添加不同劑量鉛對(duì)豬免疫機(jī)能的影響，找出飼料中鉛含量與豬免疫毒性的`劑量-效應(yīng)關(guān)系，為國(guó)家制定飼料中鉛含量限量標(biāo)準(zhǔn)提供理論依據(jù)。
1 材料與方法
1.1 材料與儀器 健康商品仔豬24頭，雌雄各半（陜西楊陵上河豬場(chǎng))，體重14～17 kg；醋酸鉛(純西安化學(xué)試劑廠)； 胎牛血清培養(yǎng)液（dmem）（美國(guó)gibco公司)；植物凝集素（ppha-p）（美國(guó)sigma公司)；二甲基亞砜(dmso，美國(guó)sigma公司)；豬淋巴細(xì)胞分離液(天津?yàn)笊镏破房萍钾?zé)任公司)；標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清(天津?yàn)笊镏破房萍钾?zé)任公司)；xd811l生化分析儀(上海迅達(dá)醫(yī)療儀器有限公司)；ca500三分類血液分析儀(日本埃爾瑪公司)；ckx41倒置顯微鏡(日本olympus公司)；mco-15ac二氧化碳培養(yǎng)箱(日本sanyo公司)；dg5030多孔酶標(biāo)測(cè)定儀(國(guó)營(yíng)華東電子管廠)。
1.2 分組與染毒 24頭豬隨機(jī)分為4組，每組6頭，分別為對(duì)照組和低、中、高劑量組(飼料中分別添加鉛5.0，15.0，45.0 mg／kg)。正常飼料適應(yīng)性飼養(yǎng)10 d后，攻毒飼養(yǎng)持續(xù)90 d。
1.3 血液中白細(xì)胞數(shù)量分析 采用乙二胺四乙酸鈉(edta-na)真空采采取豬血管抗凝血，血液分析儀測(cè)定全血中白細(xì)胞數(shù)量。
1.4 t淋巴細(xì)胞活力測(cè)定 采用t淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)測(cè)定t淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率。于豬前腔靜脈采取無(wú)菌抗凝血，經(jīng)豬淋巴細(xì)胞分離液分離出淋巴細(xì)胞，顯微鏡下稀釋至5×106個(gè)／ml，加入含pha-p的dmem培養(yǎng)藏100 μl(pha-p終濃度為9 μg／ml)，co2培養(yǎng)箱孵育68 h，之后加入四甲基偶氮噻唑藍(lán)(mtt 5 mg/ml)10 μl，繼續(xù)孵育4 h，加入100 μl dmso，輕微振蕩10 min，利用酶標(biāo)儀在490 nm波長(zhǎng)下測(cè)定其吸光度(a)值。用加pha-p孔的吸光度值減去不加pha-p孔的吸光度值代表淋巴細(xì)胞的活力。
1.5 免疫球蛋白(igm，igg，lga)和補(bǔ)體(c3，c4)測(cè)定 采用免疫比濁法，按照試劑盒說(shuō)明操作。試劑盒(上海玉蘭生物技術(shù)有限公司)。
1.6 統(tǒng)計(jì)分析 采用spss 13.0軟件進(jìn)行方差分析和duncan多重比較分析。
2 結(jié) 果
2.1 鉛對(duì)豬血液中白細(xì)胞數(shù)量及t淋巴細(xì)胞活力的影響(表1) 低中劑量組血液中白細(xì)胞數(shù)量較對(duì)照組略有降低，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)；高劑量組血液中白細(xì)胞數(shù)量顯著低于對(duì)照組(p<0.05)。3個(gè)劑量組t淋巴細(xì)胞活力與對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)，且中劑量組t淋巴細(xì)胞活力較低劑量組略有上升,但3個(gè)攻毒組血液內(nèi)t淋巴細(xì)胞活力差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。 表1 鉛暴露對(duì)豬白細(xì)胞數(shù)量和t淋巴細(xì)胞活力影響注：與對(duì)照組比較，a p<0.05。
2.2 鉛對(duì)豬血清中免疫球蛋白及補(bǔ)體含量的影響(表2) 隨著飼料中鉛含量的增高，血清中免疫球蛋白數(shù)量呈下降趨勢(shì)。結(jié)果顯示，高劑量組體內(nèi)igg、iga含量均顯著低于對(duì)照組(p<0.05)；中劑量組體內(nèi)iga含量顯著低于對(duì)照組p<0.05)；低劑量組各類免疫球蛋白含量與對(duì)照組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意(p<0.05)。隨著飼料中鉛含量的增加，c3含量呈表2 鉛暴露對(duì)豬血清中免疫球蛋白和補(bǔ)體含量影響注：與對(duì)照組比較，a p<0.05。
逐步降低趨勢(shì)，且高劑量組血清中c3含量與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)，而中、低劑量組血清中c3含量與對(duì)照組之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。c4含量低劑量組與高劑量組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。
3 討 論
t淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)是目前測(cè)定機(jī)體細(xì)胞免疫功能狀態(tài)的一種較好的方法，而測(cè)定血清中的igm、igg、iga、c3、c4含量則能較好地反映出機(jī)體體液免疫能力的強(qiáng)弱。
研究發(fā)現(xiàn)，飼喂含鉛飼料可導(dǎo)致豬體內(nèi)白細(xì)胞含量降低，t淋巴細(xì)胞活力下降，免疫球蛋白與補(bǔ)體含量下降。說(shuō)明食用含鉛飼料可以使豬免疫力降低，證明鉛具有免疫毒性，與相關(guān)報(bào)道一致〔5-8〕但也有報(bào)道表明,鉛可以促進(jìn)t淋巴細(xì)胞的 增殖和分化，低濃度的鉛在體外可以激活小鼠淋巴細(xì)胞，使其dna合成增加〔9〕。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),中劑量組t淋巴細(xì)胞活力略高于低劑量組，但遠(yuǎn)低于對(duì)照組。提示，鉛含量在一定范圍內(nèi)或許可以小幅度提高t淋巴細(xì)胞活力，但具體作用機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，低劑量組t淋巴細(xì)胞活力測(cè)定結(jié)果與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，(p<0.05)，說(shuō)明飼料中含鉛5 mg／kg對(duì)試驗(yàn)豬免疫能力的損傷已經(jīng)在少數(shù)指標(biāo)上開(kāi)始體現(xiàn)。高劑量組的試驗(yàn)豬各免疫指標(biāo)與對(duì)照組相比急劇降低，其中wbc、igg 、iga、c3與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.01)，說(shuō)明飼料中鉛含量達(dá)到45 mg／kg己經(jīng)對(duì)豬免疫力造成極嚴(yán)重影響，與成軍〔10〕等研究結(jié)果部分相似。
【參考文獻(xiàn)】
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